Introduction
Le test ELISA est un test de laboratoire qui se base sur un dosage lié à une réaction enzymatique qui libère de la couleur. Elle permet de qualifier - quantitativement ou qualitativement - la présence d'un antigène ou d'un anticorps.
Deux types de tests existent, selon la question que l'on se pose.
Le patient possède-t-il dans son sang des anticorps qui attestent de la rencontre avec le pathogène recherché ?- Elisa indirect : détection d'anticorps (dosage quantitatif ou qualitatif = vih).
Le patient ou le produit testé contient-il la substance recherchée ?- Elisa direct : détection d'antigènes (sandwich ou compétition, surtout en recherche).
Le saviez-vous ?
Le nom ELISA provient de l'acronyme anglais : Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay (litérallement : test d'immunoabsorption enzymatique)
ELISA indirect
But
Analyse qualitative ou quantitative d'anticorps ( ex : Ac anti-VIH )
Il s'agit de chercher dans le sérum du patient des anticorps dirigés contre le VIH. Pourquoi rechercher les anticorps ? Tout simplement en partant du principe que si le patient est infecté par le VIH il possède en lui des anticorps dirigés contre ce virus, car son corps cherche à se défendre. Un patient qui n'a jamais rencontré le VIH ne possède pas d'anticorps dirigés contre ce virus, car les anticorps ne sont élaborés qu'après la rencontre avec un pathogène.
Les étapes
Les étapes de ce test sont très simples :
1- Une plaque de titrage de 96 puits est généralement utilisée pour tester un grand nombre d'échantillons simultanément. Au fond de ces puits, des antigènes viraux sont fixés, ici des protéines de la capside du VIH.
2- Le sérum du patient est versé dans les puits. Comme pour chaque test en biologie, des échantillons témoins sont utilisés pour s'assurer de la fiabilité du matériel. Dans le cadre de ce test, il s'agira de sérums dont la composition est connu: un témoin négatif (= il ne contient pas d'anticorps) et un témoin positif (= il contient des anticorps). Le résultat obtenu doit être cohérent avec le résultat attendu, dans le cas contraire le test invalide.
Pour la suite du test, nous utiliserons deux patients-test: le patient 1 est sain [résultats 1], le patient est infecté [résultats 2].
- patient 1 : il ne possède pas d'Ac anti-VIH dans son sérum. Rien ne se fixe donc sur les agents viraux. Le puit est rincé : il ne reste que les Ag qui avait été fixé au fond pour faire le test. Des Ac-anti-Ac couplés avec une enzyme sont ensuite ajoutés. Comme il n'y a plus aucun AcI dans le puit, les AcII ne peuvent pas non plus se fixer et sont rincés au lavage suivant. Enfin une réaction de mise en évidence de ces derniers Ac est effectué et il ne se passe rien. Il n'y a pas de coloration : le patient est séronégatif.
- patient 2 : Des ancticorps dirigés contre le VIH sont présents dans son sérum,. Ceux-ci reconnaissent les antiviraux accrochés au fond du tube. Au rincage, ils restent accrochés. Lors de l'ajout des Ac-anti-Ac, ceux-ci ne s'accrochent et ne partent pas au lavage dû à la présente d'anticorps dans le puit. Enfin, la réaction de mise en évidence fait réagir les enzymes et révelent que des Ac-ant-Ac sont restés dans le puit. Il y a une coloration du tube, le patient est sérospositif.
Résumé des étapes d'un test ELISA indirect pour les cas de séronégativité (patient 1) et de séropositivité (patient 2).
ELISA direct
But
Analyse qualitative ou quantitative d'antigènes (ex : protéine AgP24)
Cette variante du test ELISA appelé test ELISA direct permet de doser les antigènes présents, notamment l'Ag P24 : une protéine de la capside virale du VIH. Cette protéine est souvent recherchée dans l'hypothèse d'une primoinfection, c'est à dire durant les tout premiers stades de contamination, lorsque les anticorps sont encore trop peu nombreux pour être identifiés. En cas de comportement à risque avéré du patient, il est également possible d'effectuer une recherche d'ADN viral (en savoir plus sur la structure et le fonctionnement du VIH).
Deux tests ELISA directs peuvent être pratiqués.
Test sandwich
Il s'agit du test inverse de l'Elisa indirect. Cette fois, c'est en fixant des anticorps dans les puits que l'on espère doser les antigènes présents dans la solution. Le test est dit en sandwich car il s'agit "d'ajouter des couches" à chaque étape : les antigènes provenant du sérum du patient sont pris en sandwich entre deux anticorps primaires. Une coloration de plus en plus forte indique des concentrations d'Ag croissantes.
Test compétition
1- Des Ac primaires (et non marqués) sont incubés dans le sérum à doser. Si des antigènes spécifiques de l'AcI considéré sont présent, il y a formation de couples Ac/Ag. Plus il y a d'Ag, plus des couples sont formés. A l'inverse, si le sérum ne contient aucun antigène, tous les Ac restent libres.
2- Le tout est versé dans un puit tapissé avec les mêmes Ag que ceux recherchés. Dans le cas du sérum infecté, peu d'Ac se fixeront puisqu'ils sont déjà tous en couple ! Ils seront donc évacués au rincage, et la coloration qui suivra sera donc très faible. A l'inverse, si le sérum ne contenait pas d'antigènes, tous les Ac peuvent se fixer au fond du puit et dans ce cas la coloration sera très forte.
Les résultats doivent être interprétés à l'inverse de l'Elisa sandwich : plus la concentration en Ag est grande dans l'échantillon, plus la coloration est faible.
Résumé des étapes d'un test ELISA indirect compétition pour les cas de séronégativité (patient 1) et de séropositivité (patient 2).
Quelques infos supplémentaires
Nous avons ici évoqué le cas de sérums. Toutefois, en raison de leur faible coup et de leur practicité, des tests Elisa peuvent être utilisés pour de nombreux dosages, notamment la recherche d'agents allergiques dans des tests alimentaires (protéines d'oeufs, de lait, de noix, etc).
Il existe deux types de VIH: le VIH1 et le VIH2. C'est pour cette raison qu'un test de dépistage fait appel à un Elisa Mixte. Le terme mixte n'indique non pas un mélange des différentes techniques du test mais l'utilisation d'un mélange d'agents viraux VIH1 et VIH2.
Le test ELISA peut être utilisé pour effectuer une analyse qualitative (cas de la coloration) ou pour la détection de la présence ou l'absence de la protéine recherchée.
Les analyses quantitatives sont des dosages : l'intensité de la coloration est analysée à l'aide de spectrophotomètres et fournie des informations sur la quantité de protéines dans l'échantillon.
